UMR 8126
Responsable
Pierre Busson
Microenvironnement tumoral, exosomes et microARN dans les tumeurs solides
Pierre BUSSON - DR2, CNRS
Travaux et objectifs
Notre équipe s’intéresse aux éléments biologiques extra-cellulaires vésiculaires et non-vésiculaires libérés par les cellules eucaryotes et notamment les cellules tumorales humaines. Les plus connus de ces éléments sont les microvésicules (100 à 1000 nm) et les exosomes (40 à 100 nm) qui sont entourés d’une bi-couche lipidique et contiennent des protéines et des acides nucléiques (ADN, ARN messagers et micro-ARN). Comme dans d’autres équipes, nos travaux font actuellement émerger de nouvelles entités secrétées, non-vésiculaires, notamment des complexes protéiques associés à des micro-ARN extra-cellulaires ainsi que des complexes extra-cellulaires d’ADN et d’histones.
L’étude de ces entités secrétées, vésiculaires et non-vésiculaires, répond à un double objectif :
1) mieux comprendre leur rôle dans les interactions hôte-tumeur ;
2) les utiliser comme source de nouveaux biomarqueurs tumoraux.
Jusqu’ici la plupart de nos travaux ont porté sur les carcinomes nasopharyngés (NPC) associés au virus d’Epstein-Barr (EBV). Nous avons montré que les exosomes de NPC peuvent diffuser depuis le milieu tumoral interstitiel vers le compartiment sanguin et qu’ils portent à leur surface une protéine agoniste du récepteur Tim3, la galectine 9. Celle-ci leur permet d’exercer un effet suppresseur vis à vis des lymphocytes Th1 matures (Klibi et al., Blood 113 : 1957-1966, 2009). Nous nous efforçons d’obtenir de nouveaux anticorps capables de neutraliser les effets immuno-suppresseurs des exosomes tumoraux vecteurs de galectine 9. Un autre volet de nos recherches porte sur les micro-ARN viraux secrétés par les cellules malignes. Nous avons pu mettre en évidence cette secrétion in vitro et détecter ces micro-ARN dans certains échantillons de plasma provenant de sujets porteurs de NPC (Gourzones et al. Virology J. 7 : 271, 2010). Des résultats préliminaires indiquent qu’ils sont associés dans le plasma à des complexes protéiques non-vésiculaires.
Récemment, avec le soutien d’un contrat de recherche translationnel de l’INCa, nous avons étendu aux carcinomes ovariens notre étude des exosomes et autres entités secrétées par les cellules tumorales.
Un dernier volet de nos recherches concerne l’utilisation des micro-ARN en vue d’obtenir de nouveaux index prédictifs de l’agressivité des neuroblastomes de l’enfant. Le groupe de Jean Bénard, vient de montrer que certaines altérations dans l’expression des micro-ARN tumoraux permettent d’identifier une catégorie de tumeurs à haut risque de rechute même en l’absence d’amplifications de N.myc. Il serait intéressant de pouvoir quantifier les micro-ARN concernés non seulement dans les biopsies tumorales mais aussi dans le plasma des patients.
Principales publications
- Jimenez AS, Gressette M, Barjon C, Wei M, Gourzones C, Busson P. Rapid obtention of stable, bioluminescent tumor cell lines using a tCD2-luciferase chimeric construct. BMC Biotechnol. 2011, 11:26. PubMed PMID: 21435248. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21435248
- Gourzones C, Gelin A, Bombik I, Klibi J, Verillaud B, Guigay J, Lang P, Temam S, Schneider V, Amiel C, Baconnais S, Jimenez AS, Busson P. Extra-cellular release and blood diffusion of BART viral micro-RNAs produced by EBV-infected nasopharyngeal carcinoma cells. Virol J. 2010, 7:271 PubMed PMID: 20950422. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=20950422
- Friboulet L, Gourzones C, Tsao SW, Morel Y, Paturel C, Témam S, Uzan C, Busson P. Poly(I:C) induces intense expression of c-IAP2 and cooperates with an IAP inhibitor in induction of apoptosis in cancer cells. BMC Cancer 2010, 10:327. PubMed PMID: 20576118. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=20576118
- Ayadi W, Khabir A, Hadhri-Guiga B, Fki L, Toumi N, Siala W, Charfi S, Fendri A, Makni H, Boudawara T, Ghorbel A, Gargouri A, Jlidi R, Gargouri R, Busson P, Drira M, Daoud J, Frikha M, Hammami A, Karray-Hakim H. [North African and Southeast Asian nasopharyngeal carcinomas: between the resemblance and the dissemblance]. Bull Cancer 2010, 97:475-82. French. PubMed PMID: 20385521. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=20385521
- Mengshol JA, Golden-Mason L, Arikawa T, Smith M, Niki T, McWilliams R, Randall JA, McMahan R, Zimmerman MA, Rangachari M, Dobrinskikh E, Busson P, Polyak SJ, Hirashima M, Rosen HR. A crucial role for Kupffer cell-derived galectin-9 in regulation of T cell immunity in hepatitis C infection. PLoS One 2010, 5:e9504. PubMed PMID: 20209097. http://www.ncbi.nlm.nih.go/pubmed?term=20209097
- Shi W, Alajez NM, Bastianutto C, Hui AB, Mocanu JD, Ito E, Busson P, Lo KW, Ng R, Waldron J, O'Sullivan B, Liu FF. Significance of Plk1 regulation by miR-100 in human nasopharyngeal cancer. Int J Cancer 2010, 126:2036-48. PubMed PMID: 19739117. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=19739117
- Or YY, Chung GT, To KF, Chow C, Choy KW, Tong CY, Leung AW, Hui AB, Tsao SW, Ng HK, Yip TT, Busson P, Lo KW. Identification of a novel 12p13.3 amplicon in nasopharyngeal carcinoma. J Pathol. 2010, 220:97-107. PubMed PMID: 19718711. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=19718711
- Klibi J, Niki T, Riedel A, Pioche-Durieu C, Souquere S, Rubinstein E, Le Moulec S, Guigay J, Hirashima M, Guemira F, Adhikary D, Mautner J, Busson P. Blood diffusion and Th1-suppressive effects of galectin-9-containing exosomes released by Epstein-Barr virus-infected nasopharyngeal carcinoma cells. Blood 2009, 113:1957-66. PubMedPMID:19005181. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19005181
- Friboulet L, Pioche-Durieu C, Rodriguez S, Valent A, Souquère S, Ripoche H, Khabir A, Tsao SW, Bosq J, Lo KW, Busson P. Recurrent overexpression of c-IAP2 in EBV-associated nasopharyngeal carcinomas: critical role in resistance to Toll-like receptor 3-mediated apoptosis. Neoplasia 2008, 10:1183-94. PubMed PMID: 18953427. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18953427
Collaborations nationales et internationales
Collaborations nationales
Maryse Guérin, Inserm U551, Pitié-Salpêtrière, Paris
Nadira Delhem, Institut de biologie de Lille
Frédéric Ducancel, Laboratoire d’Ingénierie des Anticorps Thérapeutiques, CEA Saclay
Ming Wei, société Cellvax, Ecole Vétérinaire d’Alfort
Carine Paturel, Innate Pharma, Marseille
Alain Doglio, Hôpital Pasteur, Nice.
Collaborations internationales
Josef Mautner, Munich, Allemagne
Toshiro Niki, Takamatsu, Japon
Friedrich Grasser, Homburg, Allemagne
Hugo Rosen, Denver, USA
Nancy Raab-Traub, Chapel Hill, USA
Jaap Middeldorp, Amsterdam, Pays-Bas
Abdelmajid Khabir, Sfax, Tunisie
Fethi Guemira, Tunis
George SW Tsao, Hong-Kong
Kwok Wai Lo, Hong-Kong
Kwok Wai Lo, Hong-Kong
Activités d'enseignement
- Responsable de l’unité d’enseignement « Virus et Cancers » du Master 2 de Cancérologie de l’université Paris-sud (3 crédits ECTS).
- Participation à l’unité d’enseignement « Biologie des épithéliums - Carcinomes » du Master 2 de Cancérologie (responsable A. Glukhova).
- Participation à l'enseignement de l'Institut de Formation Supérieure Biomédicale, module "Introduction à l’Hématologie et à l’Immunologie".
Protocoles utilisés
Biologie cellulaireCulture de cellules épithéliales sur divers supports (collagène, Polyhéma, feeder de fibroblastes)
Transfections transitoires et stables à l'aide de divers agents lipidiques ou de lentivirus
Invalidation de gènes par interférence ARN (Si RNA)
Cytométrie en fluxMarquage par immunofluorescence et observation en microscopie optique
Biologie moléculaireConstruction de plasmides
PCR (RT-PCR, PCR en temps réel)
Extraction d'ADN génomique et d'ARN
Analyse par Southern blot
Étude du transcriptome sur biopuces
Biochimie et protéomiqueFractionnement cellulaire ; isolement des radeaux lipidiques
Purification des exosomes
Électrophorèse en gel de polyacrylamide
Analyse des protéines par Western
Immunoprécipitation analytique ou préparative
Préparation d’échantillons pour l’analyse en spectrométrie de masse.
En savoir plus : Thèses soutenues, masters soutenus, liste des publications des 2 dernières années, historique des stagiaires / visiteurs accueillis
