Vectorisation virale anti-cancéreuse

• Travaux et objectifs
• Publications
• Collaborations nationales et internationales
• Activités d'enseignement
• Thèses soutenues
• Masters soutenus
  
• Protocoles utilisés
• Brevets et outils technologiques
• Propositions de stages

Karim Benihoud, Maître de conférences, Université Paris-Sud

Gaétan Cornilleau, chargé d'études, IGR Elodie Grellier, chercheur post-doctorant Dragomira Majhen, chercheur post-doctorant Christian Bressy, doctorant Université Paris-Sud, boursier MENRT Najat Raddi, doctorante Université Paris-Sud, boursière MENRT

Travaux et objectifs

Les adénovirus recombinants constituent des outils qui ont été largement utilisés dans des études pré-cliniques et cliniques à visée anti-tumorale. Ces vecteurs restent confrontés à un certain nombre de limites : d’une part, ils transduisent mal les cellules tumorales qui n’expriment pas (ou faiblement) les récepteurs à l’adénovirus, d’autre part ils peuvent au contraire transduire des cellules qui ne sont pas ciblées mais qui expriment fortement les récepteurs à l’adénovirus et aboutir à une toxicité. Cette dissémination virale est observée lors d’injection des vecteurs adénoviraux par voie systémique, mais également à la suite d’une injection localisée (intra-tumorale).


L’approche développée pour contrôler le tropisme viral consiste à modifier la capside virale par génie génétique. Dans un premier temps, des séquences peptidiques d’adressage sont insérées dans les protéines de capside permettant de doter les vecteurs adénoviraux de nouvelles voies d’entrée dans différents types cellulaires. Dans un second temps, les motifs de la capside virale permettant la fixation aux récepteurs naturels des adénovirus sont éliminés de façon à mieux contrôler le tropisme viral et la toxicité associée à leur injection.


Les différents vecteurs produits sont ensuite caractérisés in vitro pour identifier/confirmer les récepteurs utilisés et, in vivo, en analysant leur distribution chez la souris, selon la voie d’injection utilisée. Ces vecteurs à tropisme modifié sont ensuite évalués in vitro et in vivo (modèles murins) dans différentes stratégies thérapeutiques anti-tumorales telles que l’inhibition de l’angiogenèse tumorale, la radiothérapie métabolique à l’iode 131 et la virothérapie. Parallèlement, nous évaluons des approches de vaccination basées soit sur des vecteurs adénoviraux à tropisme modifié soit sur des adénovirus présentant des antigènes exposés à la surface de leur capside.

Collaborations nationales et internationales

Dr C. Dupuy, CNRS UMR 8200, IGR
Pr M. Schlumberger, Département de médecine nucléaire, IGR
Drs W. Vainchenker / S. Giraudier, INSERM UMR 1009, IGR
Dr F. Mami-Chouaib, INSERM U753, IGR
Pr J. Kanellopoulos, CNRS UMR 8619, Orsay
Dr T. Tordjmann, INSERM U757, Orsay
Pr P. Bobé, CNRS UMR 7592, Institut Jacques Monod, Paris
Dr T. Pourcher, TIRO, CEA, Nice
Dr G. Schoehn et P. Fender, CNRS UMI 3265, Grenoble
Dr A. Ambriovic-Ristov, Ruđer Bošković Institute, Zagreb, Croatie
Dr G. Vassaux, TIRO, CEA, Nice
Dr Y. Ambroise, CEA, Saclay

Activités d'enseignement

• Campus d’Orsay

Cours dans le cadre de la préparation au CAPES SVT
Cours et travaux dirigés dans le cadre de l’UE Structure et dynamique des signaux cellulaires du M2 Signalisation et physiologie cellulaires
Cours et travaux dirigés de l’UE Immunologie de M1 Travaux dirigés dans le cadre de l’UE Cycle cellulaire et potentialités des cellules de M1
Cours dans le cadre de l’UE Génétique humaine de M1
Création et responsable de l’UE Signalisation et Apoptose de M1 (Travaux pratiques, Cours, Travaux dirigés)

• Institut de cancérologie Gustave Roussy

Cours dans le cadre de l’UE Thérapie génique du M2 de Cancérologie
Cours dans le cadre de l’UE Virus et cancers du M2 de Cancérologie
Travaux pratiques dans le cadre de l’UE BioB du DU de l’Institut Supérieur de Formation Bio-Médicale (IFSBM)
Cours et travaux pratiques dans le cadre de l’UE Régulations cellulaires du DU de l’IFSBM

• Campus de Kremlin-Bicêtre

Cours dans le cadre de l’UE Approfondissement en Immunologie de M1
Cours dans le cadre de l’UE Immunologie de la Spécialité Immunologie du M2 Biologie Santé

• Campus de l’ENS de Cachan

Cours et leçons d’Immunologie dans le cadre de la Préparation à l’Agrégation de Biochimie
Cours et travaux dirigés dans le cadre de l’UE Formation pratique en Immunologie
Cours dans le cadre de l’UE Immunologie approfondie de M1

• Divers

Cours et responsable de l’UE  Immunologie moléculaire de Master 1, université de Cergy-Pontoise
Cours sur la thérapie génique et ses applications dans différents Master 2 et formations doctorales

Protocoles utilisés

• Vecteurs adénoviraux : Construction de génomes adénoviraux recombinants chez E. coli ; production des vecteurs sur lignée de complémentation ; purification et titration des vecteurs.
  
• Transfert de gènes : Administration intraveineuse ou intra-tumorale ; mesure de l’expression de gènes rapporteurs par des méthodes biochimiques / enzymatiques ou par imagerie de fluorescence / luminescence.
  
• Hépatites : Induction par différents agents (LPS, Concanavaline A, Adénovirus, Fas).
  
• Immunisation : Mesure des réponses humorales (anticorps totaux et neutralisants) ; mesure des réponses cellulaires prolifératives ou cytotoxiques.

Brevets et outils technologiques

Outils technologiques disponibles
Différents outils sont disponibles pour la communauté scientifique sur une base collaborative ou sous forme d’une prestation de services :
Adénovirus recombinants

• Adénovirus recombinants pour différents gènes rapporteurs (Tableau 1). Ils possèdent le tropisme naturel de l’adénovirus de type 5 ou un tropisme différent obtenu par modification génétique de la capside. En particulier, nous avons développé des vecteurs qui infectent plus efficacement différents types cellulaires (cellules tumorales, cellules endothéliales, cellules musculaires) et qui présentent une hépatotoxicité réduite
  
• Adénovirus recombinants pour différents transgènes (Tableau 1)
  
• Production sur demande (possibilité de production en laboratoire de confinement L2 ou L3)

Protéines recombinantes

• Fas-Fc, TNFR1-Fc, DR5-FC (TRAILR2-Fc)
  
• fibre de l’adénovirus de type 5

Brevets

• Contrôle du tropisme hépatique de l’adénovirus par modification de la protéine de capside hexon. International publication number WO 2007/148148 A1, December 27th 2007.
  
• Effet d’une préimmunisation par l’adénovirus sur l’efficacité de vaccination par des adénovirus présentant des épitopes sur leur capside. Dépôt prioritaire EP10290223 28 avril 2010.

Pour toute information, voir :  IGR&D

Propositions de stage

Année universitaire 2011-2012 :

• Stage de M2 : Vaccination à l'aide d'adénovirus porteurs d'épitopes.

Le (ou la) stagiaire sera formé(e) aux techniques de biologie moléculaire, de virologie et d'immunologie.

Voir le détail de l'offre de stage :  
Contact :
Karim Benihoud, Maître de conférences, Université Paris-Sud
Tél. : 01 42 11 45 88
benihoud@igr.fr

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